鸡大肠杆菌Cya Crp变异疫苗的效果

一、鸡大肠杆菌Cya Crp变异株苗的效果（论文文献综述）

杨晓林^[1]（2014）在《四川部分地区鸡沙门氏菌的分离鉴定及其弱毒株的培育》文中研究说明鸡沙门氏菌病是由沙门氏菌属中的一种或几种沙门氏菌引起的一类急性或慢性疾病的总称,包括鸡白痢、鸡伤寒和鸡副伤寒。临床上以败血症和肠炎最为常见。本病在世界各地普遍存在,它不仅严重危害养鸡业的发展,而且还可以通过禽产品进入食物链,并严重威胁到人类的健康,是一种人畜共患的传染病。长期以来,在我国的大部分鸡场中都是通过采用抗菌药物来防治此病的。由于抗菌药物的不合理使用,已造成了沙门氏菌耐药性的不断增强,甚至还表现出多重耐药性,如此使得防治该病变得极其困难。近些年,国外许多国家已经使用疫苗对禽类进行免疫并取得了较好的效果。本试验对四川省7个地区26个鸡场中的108份病料进行了沙门氏菌分离与鉴定,并对其流行株进行了弱毒株培育、弱毒疫苗制备等研究,旨在为该地区鸡沙门氏菌病的流行病学调查、疫苗预防和治疗提供参考资料。采用沙门氏菌选择性培养基,分别对来自26个养鸡场的108份病料进行细菌分离,并对分离菌进行形态学观察、PCR检测、生化鉴定、血清型鉴定、药敏试验和致病性试验。结果显示,从108份病料中鉴定出了28株沙门氏菌,分离率为25.9%,其中有9株符合鸡白痢沙门氏菌的生化特性,19株菌符合鸡伤寒沙门氏菌的生化特性；多数分离菌血清型为02,09,09,12型；28株鸡沙门氏菌均为致病菌,且仅对阿米卡星、新霉素、头孢哌酮等药物敏感,对大多数抗菌药物均产生耐药性。选取来自9个鸡场的10株鸡伤寒沙门氏菌,通过对其毒力和免疫原性进行检测,筛选出1株免疫原性好且毒力偏弱的菌株TQ-1-1。以TQ-1-1为出发菌株,将其进行紫外线-亚硝酸复合诱变处理,从所得突变菌株中筛选弱毒株,并对弱毒株进行传代培养及生物学特性检测。结果显示,选育出了1株遗传性稳定、免疫原性良好的鸡伤寒沙门氏菌弱毒株CN505-120,其对小鼠的LD5o为1.85×109CFU,与出发菌株TQ-1-1相比,毒力减弱了将近14倍。对CN505-120弱毒菌株进行扩大培养,然后通过菌液浓度、耐热冻干保护剂与菌体感作时间、疫苗分装体积等的筛选,优化出最佳的疫苗配制条件,并制备出成品疫苗。通过对成品疫苗的物理性状、安全性、最适免疫剂量、免疫效力、最长免疫保护期、贮藏与有效期等指标进行检验。结果显示研制的鸡伤寒沙门氏菌弱毒苗具有安全性强、免疫原性良好、易于贮存和运输的特点,可用于养鸡生产。

史同瑞^[2]（2003）在《鸡大肠杆菌Cya Crp变异株苗的效果》文中提出 鸡大肠杆菌感染是引起养鸡业经济损失最严重的疾病之一。虽然抗生素药物已广泛用于该病的防治,但是菌株抗药性及饲养成本的上升促使人们寻求其它理想防治方法。灭活疫苗、亚单位疫苗和活疫苗均已在养鸡业得到应用,并取得了一定的效果,但一些疫苗株的免疫原性仍不尽人意,最近,加拿大学

王芳^[3]（2002）在《表达绿色荧光蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌及其免疫生物学特性》文中研究表明近年来，减毒细菌活载体因其能够刺激机体产生针对活载体及其携带的外源抗原的体液、细胞免疫和局部粘膜免疫受到人们的广泛关注，特别是近期研究结果证明许多活细菌载体能够作为DNA疫苗的运送载体，可以通过口服减毒细菌进入机体，从而诱导产生针对特定抗原的各种免疫应答。但迄今为止对活疫苗载体与宿主免疫系统间相互作用规律及其调控机制知之甚少，这方面的免疫生物学研究对于研制新型基因工程疫苗将会提供重要的理论依据，且对相关疾病的免疫防制有着重要的指导价值。因此我们构建了表达绿色荧光蛋白（GFP）的减毒鼠伤寒沙门氏菌，阐明其在体内、外感染试验的动态分布及它与抗原呈递细胞的相互作用规律，这为沙门氏菌疫苗载体及相关基因工程疫苗的研究奠定了理论基础。 1 表达绿色荧光蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建与鉴定 应用DNA重组技术构建了表达绿色荧光蛋白（GFP）的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550（pYAGFP）。用EcoRI和NcoI将pEGFP质粒中的绿色荧光蛋白基因EGFP切下，克隆进表达载体质粒pYA3334的EcoRI和NcoI位点之间，构建成重组表达质粒pYAGFP，然后依次转化大肠杆菌X6212、中间宿主X3730、终末宿主X4550。X4550于LB培养基上呈绿色，在荧光显微镜下观察，细菌整个菌体发绿色荧光。在体外稳定性试实验中，重组菌经LB固体及液体培养基连续传15代后，单个菌落和菌液均呈绿色，证明构建的减毒鼠伤寒沙门氏菌是稳定的。SDS-PAGE结果显示，鼠伤寒沙门氏菌表达的GFP分子量约为27kD，这与预计的分子量大小一致。用免疫剂量的重组细菌接种BALB／c小鼠后，观察一个月未见有异常现象，同时剖检后也未见脏器有眼观病变。表达GFP的重组鼠伤寒沙门氏菌的构建为减毒沙门氏菌作为活载体的基因工程疫苗的研制提供一个优良模型，为研究重组沙门氏菌免疫生物学特性研究提供了一个有力的工具，同时在相关疾病的免疫防制基础研究中也有重要应用价值。扬州大学博士论文2重组减毒鼠伤寒沙门氏菌感染动力学 用表达绿色荧光蛋白（GFP）的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550（pYAGFP）通过尾静脉接种BALB/。小鼠，在不同时间，无菌取同一小鼠的肝脏、脾脏两种组织，经剪切、研磨、稀释后涂布于LB平板，培养后计数。同时眼部采血，制备血清，以X4550（pYAGFP）包被酶标板，用间接ELISA法测血清中抗细菌的抗体，结果表明，重组菌在这两个脏器中的数量有两个时间高峰，总的趋势是越来越少，静脉注射后约41天仍能从肝脏脾脏中分离到重组菌，这对携带外源抗原的载体激发机体产生足够的免疫应答十分有利;而血清中抗体，随时间的推移，效价越来越高，说明经静脉注射途径，可以产生较高的抗载体菌的体液免疫应答。在静脉注射后11一13天细菌数量达到一个高峰，刺激机体产生应答，使抗体滴度逐渐升高，而此时细菌数量由于被抗体中和，呈下降趋势，至17天时降至谷底，此时抗体滴度呈平缓上升阶段。随后细菌数量逐渐增多，刺激抗体滴度迅速升高，抗体效价于21天时达到一个高峰，至23天时细菌数量达到第二峰值，抗体效价开始下降，然后又逐渐上升，此时细菌数量一直在下降，而抗体效价一直在上升。因此可以初步推断，细菌数量与血清中抗细菌的抗体呈一定的相关性。 另用相同的细菌口服接种BALB/c小鼠，在不同的时间，分别无菌取肝脏、脾脏、肠系膜淋巴结和小肠派伊尔结（Peyer’5 patches，PPs），经剪切、研磨后全部涂布于LB固体培养基上以计数，同时眼部采血以制备血清，以x4550（pYA3334）、x4550 （PYAGFP）和初步纯化的GPP包被酶标板，用间接EL工SA法测血清中抗细菌的抗体，结果表明，随时间的推移，重组菌数量呈现正态分布的变化趋势，即开始和末尾数量少，中间数量多。口服后，各脏器细菌约于10一巧天呈现最高峰值，在此过程中抗体效价在逐渐上升，约到加天时抗体效价达到最高值，然后细菌数量的迅速递减至清除，而抗体效价呈缓慢下降趋势。说明在机体免疫系统的作用下，细菌会被逐渐清除于体外。有趣的是，口服途径的PPs细菌数量与血清中抗细菌的抗体呈一定的相关性，而脾脏、肝脏及肠系膜中细菌数量与血清中抗细菌的抗体滴度无关，这些结果为载体菌构建与应用提供了必要的认识。3重组减毒鼠伤寒沙门氏菌与抗原呈递细胞的相互作用 为了明晰减毒鼠伤寒沙门氏菌与抗原呈递细胞间的相互作用，首先在体外用表达绿色荧光蛋白的鼠伤寒沙门氏菌X4550（pYAGFP）感染巨噬细胞系、树突细胞系以及腹腔巨噬细胞，在感染后2、4、6、9、12、24小时，用荧光显微镜观察感染情况，发现巨噬细胞具有很强的吞噬能力，随着时间的延长，大部分细胞被感染，而且细菌逐渐在细王芳:表达绿色荧光蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌及其免疫生物学特性胞内分裂繁殖;而树突细胞系吞噬细菌的能力有限，仅有一部分细胞感染了细菌，随时间推移，细胞感染数量变化不大，而腹腔巨噬细胞的吞噬能力比巨噬细胞系还要强，这与巨噬细胞是主要吞噬细胞的性质一致。将感染细胞作透射电镜观察，结果显示，巨噬细胞较活跃，有许多伪足，细胞器发达?

鱼艳荣^[4]（2001）在《表达两种不同外膜蛋白的禽大肠杆菌融合株的构建及初步应用》文中提出对从陕西省主要养鸡地区病死鸡及鸡胚中分离的主要血清型致病性禽源大肠杆菌，采用超声波裂解和N-十二烷酰肌氨酸进行外膜蛋白（Omp）的提取，用SDS-PAGE进行Omp分型，结果18株菌共出现了3种Omp型，其中4株O1，4株O2，4株O78和3株O89均具有2个Omp型（Omp1，2型），3株O75出现了3个Omp型（Omp1，2，3型），说明不同血清型间有共同Omp型，而相同血清型间Omp型可以不同。采用不同浓度和不同作用时间溶菌酶裂解细胞壁，制备原生质体，在高渗平板上再生培养，选择原生质体形成和再生的最佳条件为酶浓度6mg/mL作用时间25min；在药敏实验基础上，结合Omp型分析，选择具有交叉耐药且Omp型不同的菌株，利用PEG诱导进行原生质体融合，在含双抗的高渗平板上筛选融合株，对不同代次的融合株分别进行革兰氏染色镜检、生化鉴定、血清型鉴定和Omp型分析，结果表明，染色镜检和生化特性均符合大肠杆菌特征；75%融合子可凝集两亲本的O抗原，25%凝集其中一个亲本的O抗原；外膜蛋白型表现为一个或两个亲本的带型，但都有不同程度的增强。经稳定性检验证明其为遗传学上稳定的融合子。用制备的融合株作为制苗菌制备E.coli铝胶苗，免疫动物后，通过抗体水平测定和攻毒实验，与单价苗比较评定融合株疫苗的免疫效果。结果表明：融合株疫苗免疫后的抗体水平与抗体消长规律与单价苗基本相同，但融合株疫苗对不同血清型E.coli混合攻毒的保护率比单价苗和对照分别提高了13%33%和60%66%，说明表达两种不同外膜蛋白的融合株疫苗的抗原谱更广，保护力更强。

二、鸡大肠杆菌Cya Crp变异株苗的效果（论文开题报告）

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、鸡大肠杆菌Cya Crp变异株苗的效果（论文提纲范文）

（1）四川部分地区鸡沙门氏菌的分离鉴定及其弱毒株的培育（论文提纲范文）

（3）表达绿色荧光蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌及其免疫生物学特性（论文提纲范文）

（4）表达两种不同外膜蛋白的禽大肠杆菌融合株的构建及初步应用（论文提纲范文）

四、鸡大肠杆菌Cya Crp变异株苗的效果（论文参考文献）

• [1]四川部分地区鸡沙门氏菌的分离鉴定及其弱毒株的培育[D]. 杨晓林. 四川农业大学, 2014(07)
• [2]鸡大肠杆菌Cya Crp变异株苗的效果[J]. 史同瑞. 畜牧兽医科技信息, 2003(01)
• [3]表达绿色荧光蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌及其免疫生物学特性[D]. 王芳. 扬州大学, 2002(01)
• [4]表达两种不同外膜蛋白的禽大肠杆菌融合株的构建及初步应用[D]. 鱼艳荣. 西北农林科技大学, 2001(01)

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